986年,她参加业余DJ大赛获得亚军,随即由Radiers乐队的主音陈德彰介绍加入香港电台工作,正式投入演艺事业。随后,加入香港电台第二台当DJ,主持节目“青春交响曲”,成为最受欢迎的电台节目之一。
1988年,周慧敏首次出演由冼杞然执导,林子祥、郑裕玲领衔主演的电影《三人世界》,该片为评为港产雅痞喜剧代表作,并获得“香港电影金像奖”最佳剧本奖。周慧敏也以此片获金像奖“最有前途新人奖”提名。
1993年,周慧敏发行了首张个人日语版大碟《纯爱传说》,宣告她正式登陆日本乐坛。此专辑除收录了粤语专辑《新曲+精选》中的13首歌曲外,还加收了《你还记得从前吗》和《自动自觉》。周慧敏也获得了日本电视台NHK最受欢迎外国女歌手奖。
1997年11月,周慧敏完成大西洋城及拉斯维加斯各一场演唱会后,便正式告别娱乐圈,开始过其平淡的生活。淡出娱乐圈的周慧敏与男朋友倪震移民温哥华,此后醉心于画画、写作及美式台球。
2006年,热爱宠物的周慧敏为了推动香港非牟利兽医诊所的计划,于5月25日-27日,在香港红磡体育馆举行三场以“因为爱,所以回来”为主题的“周慧敏BackForLove”演唱会。演唱会的所有酬劳都捐给了香港非牟利兽医诊所。
周慧敏于2011年3月在香港红磡体育馆举行“DeepV.25演唱会”,以纪念她入行25周年;同时推出EP专辑《盆栽》以答谢乐迷相伴25载的情谊。四首全新歌曲中的点题之作就是分别由林夕和黄伟文填词的《盆栽》和《无双谱》,代表了周慧敏的心声。