15岁时参加上海电视台的综艺舞蹈队,正式自食其力自己赚取学费。
1998年,毕业于上海戏剧学院,毕业后参演了第一部改编自陕西驻沪作家李春平同名小说的电影《玻璃是透明的》,马伊琍饰未命名_副本.jpg
演“小丫子”,同年出演的第一部古装电影《孔乙己》至今没有公映。
2000年,出演了《黑洞》饰演演三陪女,
马伊琍的表演事业得到了更好的提升,在电视剧《前世今生》中饰演美貌且气质超凡的秦婉莹。
2001年,出演电视剧《白天睡觉的女人》饰演李秀,在电影《西施眼》中饰演施雨,该剧在2002年美国夏威夷国际电影节中获评审团大将及亚洲最佳电影。2002年,因出演电视剧《还珠格格Ⅲ之天上人间》中紫薇一角而被大众所熟知。2004年,出演了由黄磊指导的《天一生水》饰演一个混血姑娘明妮。2006年,参演《乔家大院》扮演的“江雪瑛”,2007年,出演由赵宝刚指导的青春励志电视剧《奋斗》而知名度得到进一步的提升。